Bayern Trupp » puma beige

Zusammengenommen zeigen diese Ergebnisse, dass EGFR puma beige und EGFRvIII beide paradoxerweise mit proapoptotischen Proteinen koexprimieren und spezifisch mit PUMA in menschlichem GBM interagieren. Unter Verwendung einer Kohorte von 101 Gliomen und 12 normalen Hirngeweben untersuchten wir die Spiegel von EGFR / EGFRvIII und PUMA über IHC . Die Ergebnisse zeigen eine signifikante positive Korrelation zwischen den Expressionsniveaus von EGFR / EGFRvIII und PUMA (p = 0,039). Wie in 2a gezeigt, ist das Ausmaß der EGFR / EGFRvIII-PUMA-Coexpression bei hochgradigen / malignen Gliomen (20% bei AAs und 34,1% bei GBMs) signifikant höher als bei niedriggradigen Gliomen (6,3-7,7%). ) und normales Hirngewebe (0%).

Die Regressionsanalyse zeigt ferner, dass die Koexpression von EGFR allein, PUMA allein und EGFR / PUMA signifikant mit dem Gliomgrad korreliert (2a). Zwei repräsentative immungefärbte Gliome sind in 2b gezeigt, in denen ein GBM (oberes Feld) sowohl für EGFR / EGFRvIII als puma berlin auch für PUMA eine positive Färbung zeigt und im Gegensatz dazu ein Grad II-Gliom (unteres Feld) für beide Proteine   negativ färbt. Der im EGFR / EGFRvIII-IHC verwendete Antikörper erkennt ein C-terminales Epitop, das sowohl im EGFR- als auch im EGFRvIII-Rezeptor vorhanden ist, und aufeinanderfolgende Tumorschnitte puma blau wurden in diesen Studien verwendet. Der hohe Grad der EGFR / EGFRvIII-PUMA-Co-Expression in primären GBM-Proben stimmt mit den Beobachtungen in 1 mit den GBM-Zelllinien überein.

Die Regressionsanalyse zeigte, dass die Expression von EGFR signifikant und positiv mit PUMA korreliert (p = 0,039, R = 0,9) und dass EGFR allein, PUMA allein und ihre Co-Expression signifikant und positiv mit dem Gliomgrad korrelierten (* EGFR / PUMA, p = 0,018) , R = 0,94; ** EGFR, p = 0,00005, R = 1,0; PUMA, p = 0,021, R = 0,93). (B) Repräsentative immungefärbte primäre Gliome. Oberes Feld: Ein puma blaze primäres GBM, das sowohl für EGFR / EGFRvIII als auch für PUMA positiv gefärbt ist. Bodenplatte: Ein Grad II-Gliom, das für beide Proteine   eine negative Färbung zeigt. In diesen Studien wurden aufeinanderfolgende Tumorschnitte verwendet.

Im Gegensatz dazu war PUMA in U87MG-Vektorzellen mit sehr geringer EGFR-Expression ausschließlich in den mitochondrialen Fraktionen unabhängig von apoptotischem Stress vorhanden (5b). Die Wirksamkeit der Zellfraktionierung wird durch das Fehlen des cytoplasmatischen Markers ±-Tubulin in den mitochondrialen Extrakten und das Fehlen des mitochondrialen Markers Cox IV in den nichtmitochondrialen Extrakten angezeigt.

Das Fehlen von ±-Tubulin und Cox IV in den mitochondrialen bzw. nicht mitochondrialen Fraktionen zeigte die Wirksamkeit der Fraktionierung an. Niedrige mtPUMA-Indizes deuten darauf hin, dass PUMA hauptsächlich im Zytoplasma von U87MG-EGFRvIII-Zellen unter ungestressten und gestressten Bedingungen lokalisiert ist. (B) PUMA ist ausschließlich in den mitochondrialen Fraktionen von U87MG-Vektorzellen lokalisiert. U87MG-Vektorzellen wurden behandelt, fraktioniert und Proteine   analysiert, wie zuvor in Panel a beschrieben. Die mtPUMA-Indizes in diesen Zellen sind 1,0, was darauf hinweist, dass PUMA unabhängig von apoptotischem Stress ausschließlich in den Mitochondrien dieser Zellen nachgewiesen wird. (C) Der Abbau der EGFR-Expression durch siRNA führt puma blue zu einer erhöhten mitochondrialen Translokalisierung von PUMA.

PUMA ist hauptsächlich im Zytoplasma dieser Zellen unter unbelasteten und gestressten Bedingungen lokalisiert, was durch die niedrigen mtPUMA-Indizes angezeigt wird. Ähnliche Beobachtungen wurden auch in T98G-GBM-Zellen gefunden, die auf natürliche Weise EGFR exprimieren (5c). Der bescheidene Nachweis von mitochondrialem PUMA in diesen Zellen kann möglicherweise das Ergebnis einer unzureichenden zytoplasmatischen EGFR sein, um mit allen PUMA-Molekülen im Zytoplasma zu interagieren und diese zu sequestrieren. Wichtig ist, dass der siRNA-vermittelte Abbau der EGFR-Expression zu einem signifikanten Anstieg (16-fach) des mitochondrialen PUMA führte (Abb. 5c-links), was weiter darauf hindeutet, dass EGFR die mitochondriale PUMA-Translokalisierung modulieren kann.